DNA合成儀 -在生物學(xué)中的應(yīng)用

　　

　　DNA合成儀在分子生物學(xué)領(lǐng)域中的應(yīng)用非常廣泛，大體可以概括為以下幾個方面。

　　

　　1．合成PCR引物，DNA測序引物和雜交探針

　　

　　2．合成生物素標(biāo)記的DNA包括生物素標(biāo)記的引物

　　

　　用于DNA固相測序法(solid-phasesequencing)，采用生物素標(biāo)記的引物進行PCR擴增，再用抗生物素蛋白釣出擴增產(chǎn)物，由于抗生物素蛋白與磁珠共價結(jié)合，所以用磁鐵吸附即可釣出擴增產(chǎn)物，大大簡化了DNA測序模板的純化步驟。此外，生物素標(biāo)記的探針用于非放射性雜交檢測。DNA合成儀可用于合成生物素標(biāo)記的探針和引物。

　　

　　3．合成熒光素標(biāo)記的DNA包括熒光素標(biāo)記的引物

　　

　　可在合成的DNA片段5’端標(biāo)記幾種不同顏色熒光素(6-FAM、TET、HEX)，用于全自動DNA測序儀，還可用于PCR片段大小分析及定量分析，即基因組型分析和基因表達水平的研究。此外熒光素標(biāo)記的探針用于原位PCR雜交檢測，進行基因在染色體上的定位。而熒光素標(biāo)記的DNA包括熒光素標(biāo)記的引物皆可采用DNA合成儀進行合成。

　　

　　4．合成反義核酸

　　

　　反義核酸可用于反義調(diào)控和基因治療。反義調(diào)控指在體外合成與靶序列互補的DNA片段，轉(zhuǎn)化細胞后與靶序列結(jié)合，即在轉(zhuǎn)錄水平上抑制基因表達，但由于細胞內(nèi)存在限制酶系統(tǒng)會把外源核酸降解，所以反義核酸要經(jīng)硫化修飾后再轉(zhuǎn)化細胞。另外癌癥、艾滋病等也可采用反義核酸進行基因水平的治療。DNA合成儀是合成反義核酸的儀器。

　　

　　5．合成磷酸標(biāo)記的DNA

　　

　　用DNA連接酶把合成的磷酸標(biāo)記的DNA片段連接起來，在體外進行基因構(gòu)建。磷酸標(biāo)記的DNA常用DNA合成儀來合成。

　　

　　6．合成RNA

　　

　　用DNA合成儀合成的RNA主要用于核酶研究，核酶可作為生物導(dǎo)彈轉(zhuǎn)化到細胞中，定點切割有病基因，如癌基因等。